AVIPATH STREP Ref OD014/L Latex Agglutinations Test zum Nachweis und zur Differenzierung von Streptokokken-Kulturen. Identifikation der o o Gruppen A, B, C, D, F und G Bei 2 C bis 8 C lagern. NICHT EINFRIEREN. In-vitro Diagnostikum. EINFUHRUNG Die konventionelle Lancefield Gruppen-Bestimmung von Streptokokken-Isolaten ist arbeitsund zeitaufwändig. Die Latex-Agglutinationsmethode kombiniert mit einer schnellen und effizienten Extraktionsmethode ermöglicht die Gruppenbestimmung direkt aus Festphasen- und Flüssigkulturen. Der AVIPATH STREP vereinigt diese Vorteile für alle Streptokokken- Gruppen, welche üblicherweise in Humaninfektionen vorkommen.

Rührstäbchen Test-Objektträger Arbeitsanleitung

300 50 1

ZUSATZLICH BENOTIGTES MATERIAL Wasserbad (37C). Desinfektionsbehälter. Mikropipetten, Pipettiervolumina 50, 100 und 400l Teströhrchen

VERWENDUNGSWECK VORSICHTSMABNAHMEN Dieses Produkt ist zum in-vitro Nachweis von Laborisolaten der Strptokokken Lancefield Gruppen A, B, C, D, F und G. Nur zur Anwendung durch Fachpersonal.

Alle Kitkomponenten, ebenso wie Probenmaterial sollten als potentiell infektiös betrachtet und mit entsprechenden Vorsichtsmaßnahmen verwendet und entsorgt werden. Materialien nicht verschlucken.

TESTPRINZIP Streptokokken besitzen besitzen in ihrer Zellwand gruppenspezifische Polysaccharid-Antigene. Mit Hilfe eines Enzyms werden diese Antigene aus der Zellwand extrahiert. Den gelösten Antigenen wird eine Suspension von Latexpartikeln mit gekoppelten, gruppen-spezifischen Antikörpern aus Kaninchen zugegeben. In Anwesenheit des entsprechenden Gruppenantigens kommt es zu einer Agglutinationsreaktion. Ist kein entsprechendes Antigen in der Probe, bleibt eine homogene Latex-Suspension erhalten. KITINHALT

AVIPATH STREP Reagenzien enthalten keine Gefahrstoffe entsprechend den gegenwärtigen UK Chemicals (Hazardous Information and Packaging for Supply) Bestimmungen. Dennoch sollten alle Reagenzien als potentiell gefährdend betrachtet und mit entsprechenden Vorsichtsmaßnahmen verwendet und entsorgt werden. Die endgültige Entsorgung muss in Übereinstimmung mit den lokalen Vorschriften durchgeführt werden. AVIPATH STREP Reagenzien enthalten 0.095% Natriumazid als Konservierungsmittel. Giftig beim Verschlucken. Natriumazid kann beim Kontakt mit Bleioder Kupferrohren explosive salze bilden. Für die Entsorgung mit reichlich Wasser nachspülen.

Reagenzien für 50 Bestimmungen. LAGERUNG UND HALTBARKEIT Ref OD 014/L

Alle Reagenzien bei 2oC bis 8oC lagern. Der Test gewährleistet Ergebnisse innerhalb der Spezifikationen bis zum Verfallsdatum, welches auf dem Kit und den Reagenzien angegeben ist. Das Verfallsdatum ist der letzte Tag des Monats, welcher auf dem Kit und den Fläschchen angegeben ist. Reagenzien nicht über das angegebene Verfalssdatum hinaus verwenden.

Latex A Suspension von Latexpartikeln, gekoppelt mit Antikörpern gegen Gruppe A Streptokokken-Antigene, Reagenzien vor hohen Temperaturen und starkem 0,2%. Gebrauchsverdünnung. Lichteinfall schützen. Latex B Suspension von Latexpartikeln, gekoppelt mit REAGENZIEN NICHT EINFRIEREN, Einfrieren führt zu Antikörpern gegen Gruppe ABStreptokokken-Antigene, irreversibler Beschädigung. 0,2%. Gebrauchsverdünnung. Latex C PROBENENTNAHME UND-VORBEREITUNG Suspension von Latexpartikeln, gekoppelt mit Antikörpern gegen Gruppe C Streptokokken-Antigene, Für die Isolierung und Kultivierung der Organismen 0,2%. Gebrauchsverdünnung. können konventionelle Medien verwendet werden. Es Latex D können Bakterien aus Primär Kulturplatten oder aus Suspension von Latexpartikeln, gekoppelt mit Reinkulturen von Fest- oder Flüssigmedien verwendet Antikörpern gegen Gruppe D Streptokokken-Antigene, werden. Primärkulturen aus Flüssigmedium sollten 0,2%. Gebrauchsverdünnung. nicht verwendet werden. Im Falle geringer Wachstumsdichte oder Überwachsen der vermuteten Latex F Streptokokken durch andere Bakterien, sollte eine Suspension von Latexpartikeln, gekoppelt mit Antikörpern gegen Gruppe AFStreptokokken-Antigene, Reinkultur nach Standardverfahren für den Test erstellt werden. 0,2%. Gebrauchsverdünnung. Latex G VORBEREITUNG DER REAGENZIEN Suspension von Latexpartikeln, gekoppelt mit Antikörpern gegen Gruppe G Streptokokken-Antigene, o Reagenzien vor Gebrauch auf Raumtemperatur (20 C 0,2%. Gebrauchsverdünnung. bis 25oC) bringen und vorsichtig mischen Control + 0.5 ml Schaumbildung vermeiden. Positive Kontrolle. Lösung aus Kulturmedium, enthälte extrahierte und inaktivierte Streptokokken-Antigene der TESTEINSCHRANKUNGEN Gruppen A , B, C, D, F, & G. Gebrauchsverdünnung. ENZ Ext 20 ml Besondere Beachtung gilt bei der Testung von Extraktionsenzym. Lösung enzymatischer reagenzien Organismen direkt von Selektivmedien. Hohe (ca. 0.05%) . Gebrauchsverdünnung. Salzkonzentrationen können das Latex-Reagenz destabilisieren und zu Ergebnisvarianzen führen. Testergebnisse sollen immer unter Berücksichtigung aller klinischen Daten interpretiert werden.

TESTDURCHFUHRUNG

LEISTUNGSMERKMALE

Agarkolonien 1. (a) 400L Extraktionsenzym in ein Teströhrchen pipettieren. (b) 2-3 Kolonien steril vom Medium abnehmen. Die Kolonien im Extraktionsenzym emulgieren. Flüssigkulturen 1. 100L einer Übernachtkultur in ein Teströhrchen mit 400L Extraktionsenzym pipettieren. 2. Teströhrchen für 10 Minuten bei 37°C im Wasserbad inkubieren, nach 5 Minuten kräftig schütteln. 3. Je 50L extrahierte Bakteriensuspension auf die Auftragestellen des Objektträgers pipettieren 4. Jedes der Latex-Reagenzfläschchen unmittelbar vor Gebrauch schütteln und je einen Tropfen auf die entsprechenden Auftragestellen aufbringen. 5. Probe auf jedem Feld mit dem Latex-Reagenz mischen, für jedes Feld ein frisches Rührstäbchen verwenden. 6. Testkarte für 1 Minute leicht schwenken. Eine der Gruppen sollte in dieser Zeit eine deutliche Agglutination aufweisen. Die anderen 5 Gruppen zeigen keine Agglutination. Ergebnis notieren und Testkarte vorschriftsmässig entsorgen. AUSWERTUNG Deutliche Agglutination mit einer Gruppe und fehlende Agglutination mit den anderen 5 Gruppen stellt eine eindeutige Identifikation dieser Gruppe dar. Im Falle anderer Agglutinationsmuster sind weitere Untersuchungen notwendig. Ein mögliches Schema für weitere Untersuchungen ist in u.a. Abbildung dargestellt. Die Positivkontrolle sollte mit jedem Latex-Reagenz innerhalb einer Minute ein positives Ergebnis aufweisen. Ein negatives Ergebnis kann durch die Verwendung nicht-okkulierten Extraktionsenzym erzeugt werden. Im Falle dass die Kontrollen oder ein bekanntes Serum nicht die erwarteten Ergebniss zeigen, ist der Testlauf ungültig.

Anmerkungen zum Strptokokken Identifikations Schema. 1. Streptococcus pneumoniae ist hämolysierend, optochinonempfindlich und gallelöslichlich. 2. Straphylokokken und Listeria monocytogenes sind hämolysierend und Katalasepositiv. Sie unterscheiden sich von Streptokokken durch ihre bakterielle Morphologie. 3. Enterokokken erscheinen typischerweise als Diplokokken oder kuzer Organismenketten. Aerokokken erscheinen als Einzelzellen oder Tetraden, sie sind nicht hämolysierend, wachsen in 6,5% NaCl-Bouillon und geben variable Reaktionen im Galle-Äsculin-Test. HINWEISE Zur Vermeidung von Kreuzkontaminationen Einmal-Pipettenspitzen für jede Probe verwenden.

Reproduzierbarkeit AVIPATH STREP 100% (+/- eine Verdünnungsstufe). In Vergleichsstudien mit zwei kommerziellen Testen wurde für den AVIPATH STREP eine Spezifität von 100% und eine Sensitivität von 100% ermittelt. STREPTOKOKEN IDENTIFIKATIONS SCHEMA Isolierung vermuteter “Steptokokkus” spezies. Ausschluss von Streptococcus pneumoniae im Falle vonAlpha-Hämolyse (1) Ausschluss von Staphylokokkus und Listeria im Falle von Beta-Hämolyse (2) Zellmorphologie notieren (2,3) AVIPATH STREP Gruppenbestimmung durchführen.

Positiv mit einer Gruppe Positiv mit Gruppe D In Galle-Äsculin und 6.5% NaCI –Bouillon weiterzüchten Galle- Äsculin positiv NaCI Bouillon positiv = Gruppe D, enterococcus3 NaCI Bouillon negativ = Gruppe D, non-enterococcus Galle-Äsculin negativ, non B Haemolytic NaCI Bouillon negativ = Viridans streptococci Nicht positiv mit Gruppe D Positive mit Gruppe B = Group B nicht positiv mit Gruppe B Beta Hämolyse = Group identified keine Beta Hämolyse = Biochemische Identifikation nötig Positiv mit mehr als einer Gruppe Reinkulturen erstellen und Testwiederholung Biochemische Identifikation nötig Einige Stämme können Gruppe D und Gruppe G Antigen besitzen Negativ Testwiederholung mit größerer Anzahl von Bakterien Weiterhin negativ Beta Hämolyse= Nicht gruppierbar (Keine Gruppen A-D, F oder G) Keine Beta Hämolyse In Galle-Äsculin und 6.5% NaCI –Bouillon weiterzüchten Galle- Äsculin positiv 3 NaCI Bouillon positiv = Gruppe D, enterococcus NaCI Bouillon negativ = Gruppe D, non-enterococcus Galle-Äsculin negativ NaCI Bouillon negativ = Viridans streptococci REFERENZEN 1. Lancefield, R.C. Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 38, 473 (1938) 2. Harvey, C.L., McIIImurray, M.B.Eur.J.Clin.Microbiol. 3, 6, 526 (1984) 3 Facklam, R.R. “Manual of Clinical Microbiology”, 3rd edn., Amer. Soc. for Microbiology, Washington, D.C., pp. 88-110 (1980) 4. Lue, Y.A., Howit, I.P., Ellner, P.D. J. C.in. Microbiol. Vol. 8.pp. 326-328 (1978) 8023A ISSUE 4 Revised June 2009. German  Omega Diagnostics Ltd., 2009

Alle Gefässe sofort nach Gebrauch wieder verschliessen o

o

Alle Reagenzien vor Gebrauch auf Raumtemperatur (20 C bis 25 C) bringen. Alle Reagenzien durch vorsichtiges Schütteln mischen. Zur Anwendung durch Labor-Fachpersonal.. Keine beschädigten oder kontaminierten Kitkomponenten verwenden.

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