MÉTODOS DE ESTUDIO EN BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR El desarrollo de técnicas para el estidio de las células determinó el origen de la biología molecular y dirige en la actualidad el avance de la misma. LA BIOLOGÍA CELULAR APARECIÓ EN EL MISMO MOMENTO QUE LA MICROSCOPÍA Teoría celular: Theodore Schwann 1838
MICROSCOPÍA: conceptos clave AUMENTO: Es la relación que existe entre el tamaño de la imágen observada y el tamaño real del objeto RESOLUCIÓN: Es la capacidad de un método de observación para dos objetos cercanos como Células de corcho según Robert Hook 1665 diferentes. LÍMITE DE RESOLUCIÓN: Distancia mínima entre dos objetos que son diferenciables a través de un método de observación
LÍMITE DE RESOLUCIÓN Ojo Humano: 0,2 mm Microscopio óptico: 0.22 μm Microscopio electrónico: 0,2 nm
MICROSCOPIO ÓPTICO
Resolución= 0.61 λ/AN
AN = η sen α
PARTES DE UN MICROSCIOPIO ÓPTICO MECÁNICAS Base Brazo Tubo Revólver Platina Tornillo macrométrico Tornillo micrométrico ÓPTICAS Ocular Objetivo Condensador LUMÍNICAS Fuente de luz
TINCIÓN: Es necesaria por la falta de contraste de los componentes celulares
NATURAL
+
-
TINCIÓN DE GRAM
TACO
Hematoxilina -eosina
MANIVELA
CUCHILLA
MICRÓTOMO
MEJORAS EN LAS TÉCNICAS DE MICROSCOPÍA ÓPTICA Contraste de fase e interferencia diferencial: Utiliza el defasaje de las ondas que se genera cuando la luz atraviza zonas de la célula con diferente densidad y lo
transforma en contraste.
Campo oscuro: Resalta el contraste natural de la célula mediante la proyección de un haz de luz desde uno de los lados. La células se observa como un cuerpo iluminado sobre un fondo oscuro.
TIPOS ESPECIALIZADOS DE MICROSCOPIOS ÓPTICOS
Campo luminoso
Interferencia diferencial
Contraste de fase
Campo oscuro
Microscopía de Fluorescencia: Se basa en la utilización de pigmentos fluorescentes que absorben la luz de una determinada lingitud de onda (color) y emiten en otra longitud de onda (color). Inicialmente la luz es filtrada para iluminar la muestra sólo con longitudes de onda a las que absorbe el pigmento fluorescente. La luz emitida por la muestra es nuevamente filtrada para observar sólo el tipo de luz que emite el pigmemto. La célula se observa sobre un fondo oscuro y se perciben tantos colores como pigmentos se utilicen. CITOESQUELETO
NÚCLEO
PROTEÍNA FLUORESCENTE VERDE
VIENDO LOS OBJETOS EN TRES DIMENSIONES: MICROSCOPÍA CONOFOCAL
MICROSCOPÍA de exitación multifotónica
MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
Long onda e-: 0.004 nm, NA:
TINCIÓN CON IONES DE METALES PESADOS
Proteínas de la membrana celular observadas por CRIOFRACTURA
FRACCIONAMIENTO SUBCELULAR
CROMATOGRAFÍA
ELECTROFORESIS
CULTIVO DE CÉLULAS ANIMALES
Callo formados a partir de cultivo de cálulas vegetales