“Especialización Bacteriología Clínica” Chaco, 7-8 de junio de 2013
“Vibrio cholerae: cholerae: flujograma diagnóstico”
María Rosa Viñas Servicio Enterobacterias INEI – ANLIS “Carlos G. Malbrán”
Flia. Vibrionaceae Características del género Vibrio Bacilos Gram-negativos, 0,5 a 0,8 x 1,4 a 2,6 µm Anaerobios facultativos Móviles Oxidasa positivos, excepto V. metschnikovii Su crecimiento requiere o es estimulado por ClNa Su metabolismo es fermentativo, pueden fermentar glucosa entre otros sustratos
Vibrio cholerae Clasificación por serogrupos Vibrio cholerae O1 Vibrio cholerae O139
asociados a cólera epidémico
Vibrio cholerae no-O1, no-O139
Vibrio cholerae O1 Biotipos: Clásico y El Tor
Serotipos: Ogawa, Inaba y, raramente, Hikojima
Factores de virulencia asociados al cólera V. cholerae O1 y O139 • Toxina de cólera (cholera toxin, CT) • Factor de colonización (toxin-coregulated pilus, TCP)
Toxina de cólera – mecanismo de acción
Toxina de cólera – codificación genética • Los genes que codifican la toxina CT (ctxAB) se encuentran dentro del genoma de un bacteriófago lisogénico filamentoso conocido como CTXΦ. • Este fago se encuentra integrado en el genoma de V. cholerae en uno (El Tor) o dos loci (Clásico) • El factor de colonización actúa como receptor del CTXΦ.
Otros factores de virulencia asociados a V. cholerae (O1, O139 y no-O1, no-O139) • NAG-ST: toxina termoestable • RTX: citotoxina • Hemolisina El Tor o Citolisina: toxina formadora de poros - apoptosis • Hemaglutinina: adhesina • Sistema de secreción tipo III • Neuraminidasa
Manifestaciones Clínicas (V. cholerae O1 y O139) • La infección puede ser asintomática o presentar distinta gravedad, hasta la forma más severa, cólera: diarrea acuosa (deposiciones como “agua de arroz”), vómitos y deshidratación con perdida de electrolitos • Aproximadamente una de cada 20 personas infectadas puede tener la enfermedad grave. La pérdida rápida de líquidos corporales lleva a la deshidratación y a la postración. Sin tratamiento adecuado, puede ocurrir la muerte en horas • Dosis infectiva: 103 a 106 microorganismos • Período de incubación: 1 a 3 días
Manifestaciones Clínicas (V. cholerae no no--O1, nono-O139) • habitualmente se aísla de casos esporádicos de diarrea y de infecciones extra-intestinales (principalmente en personas en contacto con el ambiente acuático). Por lo general, no existe contagio de persona a persona • se han descripto casos de bacteriemia especialmente en pacientes con patología hepática • Las infecciones por V. cholerae no-O1, no-O139 se presentan a lo largo de todo el año, aunque son más frecuentes en los meses más cálidos. • se han reportado brotes de diarrea causados por este microorganismo en diferentes regiones del mundo, incluyendo Argentina
Epidemiología V. cholerae V. cholerae es un habitante autóctono de ecosistemas acuáticos • Sensible a las temperaturas y nutrientes • Patrón cíclico de brotes: florecimiento de copépodosplancton • Las personas pueden infectarse por la ingesta de agua o alimentos contaminados (generalmente mariscos ostras , mejillones crudos ó tratamiento calor mínimo) • Durante una epidemia de cólera, la fuente de contaminación son generalmente las heces de una persona infectada. La enfermedad puede diseminarse rápidamente en áreas con tratamientos inadecuados de agua potable y pobres condiciones sanitarias.
Métodos rápidos comerciales para Vibrio cholerae Nombre Comercial
Blanco
Cholera SMART: Sensitive Membrane Antigen Rapido Test, New Horizonts Diagnostics Corp., Columbia, Maryland, EUA
Vibrio cholerae O1
Pathogen - Detection - Vibrio Kit PDK, Intelligent cholerae Monitoring Systems, O1 Gainsville, Florida, EUA
Método
Tipo de muestra
Inmunológico con anticuerpo monoclonal marcado con oro coloidal (Bolaños HM y col. Rev Panam Salud Pública.2004; 16: 233-41).
Materia fecal fresca ó hisopado rectal
Detección directa y a partir de medio de enriquecimiento Agua Peptonada Alcalina (APA), luego de 6 a 18 h de incubación
E: 100% S: 100%
Materia fecal fresca ó hisopado rectal
Detección directa y a partir de medio de enriquecimiento APA, luego de 6 a 18 h de incubación.
E: 85,7 % a 77,4 %, depende del tipo de muestra y tratamiento antibiótico previo. S: 100%
Prueba de tamizaje Inmunológico con anticuerpos monoclonales absorbidos en partículas de látex.(Bolaños HM y col. Rev Panam Salud Pública.2004; 16: 233-41). Prueba de tamizaje
Requerimiento. Tiempo Especificidad / de procesamiento Sensibilidad
Ensayos de PCR estandarizados para Vibrio cholerae Nombre de la Técnica
Blanco
Método
VC 16S-23S rRNA PCR Múltiple PCR Múltiple (Chun et al, 1999) Prueba de tamizaje y V. cholerae, ctxA, Gen específico de especie confirmatoria tcpA El Tor V. cholerae
Tipo de muestra Cepa aislada
ctxA, tcpA El Tor (Rivera et al, 2003) Genes de la toxina de cólera y el factor de colonización TCP alelo El Tor
PCR V. cholerae
PCR Múltiple para antígenos somáticos O1/O139
PCR simple VC 16S-23S rRNA Prueba de tamizaje (Chun et al, 1999) con Control Interno Gen específico de especie de Amplificación (CIA) V. cholerae
wbe O1/O139 (Rivera et al, 2003) Genes que codifican los antígenos somáticos O1 y O139
PCR Múltiple Prueba de tamizaje y confirmatoria
Muestras de agua, plancton y mejillones. Muestras de materia fecal Cepa aislada
Requerimientos. Especificidad / Tiempo de procesamiento Sensibilidad Detección preliminar a partir E: 100% de TSA, luego de 24 h de incubación a 37°C Confirmación y detección de genes de virulencia luego de identificación bioquímica a partir de colonia aislada
Extracción directa de ADN E: 100% Detección a partir de medio S: 102 UFC/ ml de enriquecimiento APA, luego de 6-18 h de incubación Detección preliminar a partir E: 100% de TSA, luego de 24 h de incubación a 37°C Confirmación de genes para antígenos O1/O139, luego de identificación bioquímica a partir de colonia aislada
Flujograma a partir de materia fecal Muestra de materia fecal en Cary Blair Tamizaje por PCR APA: 6-8 hs 37º C Extracción de ADN
Agar TCBS / TSA o Agar sangre: 18hs 37ºC 24-48 hs Kligler-LIA-Estría TSA
PCR V. cholerae/ctxA/tcpA El Tor
Oxidasa, Pruebas bioquímicas complementarias Serotipificación O1 y O139 48-72 hs V. cholerae O1, O139 o no-O1 no-O139 ctxA, tcpA El Tor (PCR)
PCR O1 y O139 +4 hs
Diagnóstico: Flujograma de aislamiento a partir de agua 5 litros de muestra
Filtrado 2 lts. a través 0.22 um
Filtrado 3 lts. a través 0.22 um Extracción de ADN a partir de los filtros
Filtros + 50 ml APA
Incubar 36 ±1°C x 6-8 hs TCBS —> T1N1—> Oxidasa
Identificación bioquímica y serotipificación
PCR V. cholerae ctxA/tcpA El Tor O1/O139
Viable cultivable y viable no cultivable
Extracción de ADN: Rivera Environ Microbiol 2003; 5: 599-606
PCR Multiplex V. cholerae/ctxA/tcpA •Identifica si en la muestra hay V. cholerae •Identifica si hay aislamientos que poseen ctxA, gen de la toxina colérica (CT) •Identifica si hay aislamientos que codifican para la proteína estructural de la fimbria TCP codificada por tcpA. Solamente reconoce el alelo El Tor
PCR Multiplex V. cholerae/ctxA/tcpA Primers utilizados en la reacción PCR V. cholerae ctxA tcpA El Tor
Primers
Amplicon (bp)
pVC-F2 pVCm-R1 CT 94F CT 614R TCP 72F TCP 477R
300 564 461
Secuencia Primers 5´- TTAAGCSTTTTCRCTGAGAATG - 3´ 5´- AGTCACTTAACCATACAACCCG - 3´ 5´- CGCGCAGATTCTAGACCTCCTG - 3´ 5´- CGATGATCTTGGAGCATTCCCAC - 3´ 5´- CACGATAAGAAAACCGGTCAAGAG - 3´ 5´- CGAAAGCACCTTCTTTCACGTTG - 3´
Chun et al. AEM 1999; 65: 2202-2208 Rivera et al. AEM 2001; 67: 2421-2429.
Condiciones de ciclado etapa 1 etapa 2 etapa 3 etapa 4 etapa 5 etapa 6
Mezcla de reacción Reactivos H20 Buffer 10X Cl2Mg 50 mM dNTPs (2.5mM) CT 94F (10 µM) CT 614R (10 µM) TCP 72F (10 µM) TCP 477F (10 µM) VC - F2 (10 µM) VC - mR1 (10 µM) Taq 5U/ml Templado ADN Total
Concentración csp 1X 2 mM 0.2 mM 0.4 uM 0.4 uM 0.4 uM 0.4 uM 0.8uM 0.8uM
1X (ul) 9.3 2.5 1 2 1 1 1 1 2 2 0.2 2 25
94ºC 94ºC 60ºC 72ºC 72ºC 4ºC
2 min 45 seg 45 seg 45 seg 10 min
30 ciclos
ctxA tcpA V. cholerae
Marcador de PM
Control negativo
PCR Multiplex O1/O139 •Detecta los serogrupos O1 y O139 que son los que están asociados, por lo general, a las cepas causales de cólera (productores de CT) •Permite asignar el serogrupo a los aislamientos autoaglutinables •Atención: hay cepas O1 y O139 que no son productoras de CT, y pueden aparecer cepas de otros serogrupos que si lo son.
PCR Multiplex O1/O139 Primers utilizados en la reacción PCR
Primers VCO1-F2 VCO1-R2 VCO139-F2
O1 O139
VCO139-R2
Amplicon (bp)
Secuencia Primers 5´ - CAACAGAATAGACTCAAGAA - 3´ 5´ - TATCTTCTGATACTTTTCTAC - 3´ 5´- TTACCAGTCTACATTGCC - 3´
647 741
Rivera et al. Environ Microbiol 2003; 5: 599-606
5´- CGTTTCGGTAGTTTTTCTGG - 3´
Mezcla de reacción Reactivos Concenctración H2 0 csp Buffer 10X 1X Cl2Mg 50 mM 1.5 mM dNTPs (2.5 mM) 0.2 mM VCO1-F2 (10 µM) 0.4 µM VCO1-R2 (10 µM) 0.4 µM VCO139-F2 (10 µM) 0.4 µM VCO139-R2 (10 µM) 0.4 µM Taq 5U/¬l 0.75 U DNA Total
1X (ul) 13.35 2.5 1 2 1 1 1 1 0.15 2
Control O139
25
Condiciones de ciclado etapa 1 etapa 2 etapa 3 etapa 4 etapa 5 etapa 6
Control O1
94ºC 94ºC 52ºC 72ºC 72ºC 4ºC
2 min 1 min 1 min 90 seg 10 min
30 ciclos
Marcador de PM
Control negativo
Caracterización de aislamientos por PCR Detección de factores de virulencia Hay diferentes factores de virulencia que pueden explicar la patogenicidad de cepas CT negativas de V. cholerae para los que tenemos implementada la PCR:
ToxR HlyA/VCC
Ampliamente distribuidos en V. cholerae
RTX Neuraminidasa Sistema de secreción de tipo III NAG-ST (codificada por el gen stn/sto) tcpI (regulador de TCP)
Rol patogénico
Colonias características de Vibrio cholerae en agar TCBS
Caracteres bioquímicos de Vibrio cholerae Oxidasa Kligler TSI Glucosa (prod. de ácido) Sacarosa (prod. de ácido)
100 % K/A, no gas, no SH2 A/A, no gas, no SH2 100 % 100 %
Lisina Arginina Ornitina
99% 0% 99 %
Crec. en caldo al 0% NaCI Crec. en caldo al 1% NaCl Crec. en caldo al 6% NaCl Crec. en caldo al 8% NaCl Crec. en caldo al 10% NaCl
100 % 100 % 53 % 1% 0%
Roja de Metilo (1% Na CI) Voges-Proskauer (1% Na CI)
99 % 75 %
Reactions of V. cholerae in Kligler’s iron agar (left) and triple sugar iron agar (right)
Prueba del indol del triptofano
Caracteres bioquímicos de miembros de la FamiliaVibrionaceae Familia Vibrionaceae y géneros relacionados, relacionados, patógenos para el hombre Agar TCBS
V. cholerae
V. Alginoly ticus
V. fluvialis
V. furnisii
V. hollisae
V. Metschni kovii
V. mimicus
V.parahaemolyticus
V. vulnificus
Aeromonas hydrophila
Plesiomonas shigelloides
Col.amar.
Col.amar
Col.amar
Col.amar
No crece
Col.amar
Col.verde
Col.verde
Col.verde
Col.amar
Col.verde
Oxidasa
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
+
Arginina dehidrolasa (1%NaCl)
-
-
+
+
-
+
-
-
-
+
+
Ornitina decarboxilasa (1%NaCl)
+
+
-
-
-
-
+
+
55%
-
+
Lisina decarboxilasa (1%NaCl)
+
50%
-
-
-
35%
+
+
+
+
+
0%
+
-
-
-
-
-
+
-
-
+
+
1%
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
6%
53%
+
+
+
83%
78%
49%
+
55%
+
-
8%
-
+
71%
78%
-
44%
-
80%
-
-
-
10%
-
+
-
-
-
-
-
-
-
-
-
sacarosa
+
+
+
+
-
+
-
-
-
+
-
Celobiosa
-
-
39%
-
-
-
-
-
+
+
-
Lactosa
-
-
-
-
-
50%
-
-
85%
-
-
Arabinosa
-
-
+
+
+
-
-
+
-
84%
-
Manosa
78%
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
Manitol
+
+
+
+
-
+
+
+
45%
+
-
75%
+
-
-
-
+
-
-
-
+
-
Crecimiento en:
Acidificac. a partir de:
VogesProskauer
Col. amar.: colonia amarilla / Col. Verde: colonia verde. TCBS: agar Tiosulfato Citrato sales Biliares Sacarosa
Diferenciación entre Vibrio cholerae y otros géneros GramGram-negativos, oxidasa positivos Pruebas bioquímicas
V. cholerae
Aeromonas
Plesiomonas
Sacarosa
+
+
-
Inosita
-
+
+
Manita
+
+
-
Arginina dehidrolasa
-
+ (excep. A.veronii biovar
+
Lisina decarboxilasa
+
+ (excep. A.caviae (-)
+
Ornitina decarboxilasa
+
- (excep. A.veronii biovar
+
veronii (-)
veronii (+) )
Decarboxylase and dihydrolase reactions for V. cholerae are, from left to right, lysine (+), arginine (-), ornithine (+), and control (-).
V. cholerae grows in the absence of NaCl (tube B), but growth is stimulated by the addiction of 1% NaCl (tube A). Tube C, 0% NaCl, inoculated with V. parahaemolyticus, shows no growth.
Flujogram a de Serotipificación pa ra Vibrio cholerae Cep a co n ca ra cte rística s b io qu ímica s de V ib rio cho le ra e
E str ía en TSA
A g lutin a ción con s olu ció n sa lin a a l 2%
N eg ativa
Po sitiva
Ag lu tina ció n co n P oli vale nte O1
Ne ga tiva
Vi br io ch ole ra e n o O 1
Cep a r ug osa
P ositi va
V ib rio cho ler ae O1
Ag lu ti na ció n co n O 13 9 A glu tina ció n co n Ina ba A gl utin ació n co n O ga wa
Neg ativa
Po sitiva
V . ch ole ra e n o O 1, n o O 13 9 V . ch ol era e O 1 39
Po sitiva
V.ch ole ra e O 1, Ina ba
Po sitiva
V . ch o ler ae O1 , O g aw a
Antisera to the O1 serogroup of V. cholerae will agglutinate homologous organisms (left). A normal serum or saline control (right) does not show agglutination
Cólera en América Latina
Casos índices Enero 1991 Agosto 1991 Febrero 1992 Noviembre 1994
Reemergencia en enero 1991, en Perú, tras 100 años sin casos registrados Diseminación a América del Sur y Central Más de un millón de casos notificados desde 1991
Vigilancia a Nivel Nacional Creación de Red de Laboratorios de Diarreas, 1991 Aislamiento y caracterización de V. cholerae. Implementación de técnicas feno y genotípicas: ELISA para detección de CT, PCR, hibridación y subtipificación (PFGE y VCR-PCR) Detección de un aislamiento O139 asociado a un caso de diarrea , Salta 1994, no portador de genes ctxA, tcpA alelo El Tor Aislamientos de V. cholerae no O1- no O139 asociados a casos de gastroenteriris, sepsis e infecciones extraintestinales . Determinación de la diversidad genética de V cholerae . Creación de una Base de Datos Nacional para V. cholerae en el marco de la Red PulseNet de América Latina y El Caribe
Vigilancia a Nivel Nacional Identificación de reservorios ambientales de Vibrio cholerae O1 viable no cultivable en el Río de la Plata, plataforma marina bonaerense y Ríos Salí y Lules, Tucumán Detección y caracterización de un grupo de aislamientos de V. cholerae O1, no portadores de genes ctxA, tcpA alelo El Tor: Variante Tucumán
Proyecto SECYT Redes 2003-2006: “Cólera: Reservorios, vías de transmisión y caracterización de nuevos factores de virulencia de Vibrio cholerae” . Coordinadora: Dra. Norma Binsztein.
Cólera en Argentina Agente causal: Vibrio cholerae O1, biotipo El Tor 1992-1998 Hubo 7 brotes en meses estivales: • casos notificados: 4833 • muertes: 83 • aislamientos confirmados por el INEI: 1947 1999 Un caso en Santa Fe 2005 Un caso en Chaco
V. cholerae no-O1, no-O139 en Argentina (1992-2010) Nº total de aislamientos caracterizados en el LNR: • De origen humano: 519 • De origen ambiental: 736 Se reconocieron 3 brotes de gastroenteritis: • Año 2000, Salta: brote comunitario, causado por múltiples subtipos genéticos • Año 2007, Tucumán: brote comunitario, asociado a un subtipo predominante • Año 2008, Santa Fe: brote en una institución neuropsiquiátrica, causado por un único subtipo
Subtipificación de V. cholerae O1 por Electroforesis en Campo Pulsado (PFGE) Dice (Opt :1.50% ) (T ol 1. 5%-1.5% ) (H> 0.0% S>0. 0%) [0.0% -100.0% ]
100
95
90
PFGE-SfiI
85
80
75
PFG E-SfiI
58H/93 ST29161 CH1502 CH2507 J18/W ST10568
Clon epidémico
T227/W
V. cholerae O1 CT+
SF336 CH2283/05 F99H
Chaco 2005
SF1902 SF366 RB-1 SJ179/W T717 T12550 T13074 T2220 T522 T5957 T610 T612/W T777 T1437
Variante Tucumán
V. cholerae O1 CT-
V. cholerae O1 – Chaco 2005 Subtipificación por PFGE 1
2 3
4
5 6
7 8
9 10 11 12 13 14 15 1, 6, 11, 15 S. Braenderup H9812 2 V. ch O1 PERU 2002 SfiI 3 V. ch O1 ARG 1993 SfiI 4 V. ch O1 ARG 2005 col. 1 SfiI 5 V. ch O1 ARG 2005 col. 2 SfiI 7 V. ch O1 ARG 2005 col. 3 SfiI 8 V. ch O1 ARG 2005 col. 4 SfiI 9 V. ch O1 PERU 2002 NotI 10 V. ch O1 ARG 2005 col. 1 NotI 12 V. ch O1 ARG 2005 col. 2 NotI 13 V. ch O1 2005 col. 3 NotI 14 V. ch O1 2005 col. 4 NotI
V. cholerae O1 Brote de cólera en Paraguay 2009 Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]
PFGE-NotI
100
90
80
PFGE-NotI
SF1902
Argentina
Santa Fe
Human
1998-02-23
SF366
Argentina
Santa Fe
Human
1999-12-17
CH1502
Argentina
Chaco
Human
1994-02-15
CH2507
Argentina
Chaco
Human
1997-07-25
J18/W
Argentina
Jujuy
Environment
1992-04-07
ST10568
Argentina
Salta
Stool
Human
1995-03-08
T227/W
Argentina
Tucumán
Water
Environment
1993-04-06
F99/W
Argentina
Formosa
Human
1992-05-05
SJ179/W
Argentina
San Juan
Environment
1993-12-03
T1437
Argentina
Tucumán
Human
1997-02-10
T717
Argentina
Tucumán
Human
1998-01-30
T13074
Argentina
Tucumán
Stool
Human
1994-12-30
T522
Argentina
Tucumán
Stool
Human
1998-01-20
T777
Argentina
Tucumán
Stool
Human
1994-01-28
T5957
Argentina
Tucumán
Stool
Human
1993-12-03
T610
Argentina
Tucumán
Stool
Human
1994-01-22
T2220
Argentina
Tucumán
Stool
Human
1994-02-25
T612/W
Argentina
Tucumán
Water
Environment
1994-03-14
T12550
Argentina
Tucumán
Stool
Human
1995-01-03
450
Paraguay
Filadelfia
Stool
Human
CH2283
Argentina
Chaco
Human
2005-10-01
RB-1
Argentina
Formosa
Environment
1992-04-01
Stool
Stool
Cólera en Haití Enero 2010: terremoto en Haití 21 de Octubre 2010: se confirma brote de cólera 27 de Octubre: 4,722 casos, 303 muertes Afectó principalmente a mayores de 5 años .
Noviembre-Diciembre: diseminación a todo el país y a República Dominicana. Casos aislados en Florida, USA Al 13 de Noviembre 16,111 casos (hospitalizados) y 992 muertes en Haití.. Fuente: CDC, USA
Cólera en Haití Características de la cepa asociada causal del brote: Vibrio cholerae O1 Ogawa, híbrido: biotipo El Tor . con toxina de cólera alelo Clásico, perfil de resistencia: S a tetraciclina, ciprofloxacina y kanamicina R a trimetoprima-sulfametoxazol, furazolidona, ácido nalidíxico, sulfisoxazol y estreptomicina Fuente: CDC, USA
Cólera en Haití: comparación con aislamientos de América Latina (brotes 19931993-1998) Sfi SfiII-PFGE Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]
PFGE-SfiI
PFGE-SfiI
País
100
90
80
Nº Aislamiento
Fecha de aislamiento
SF336
Argentina
.1999-12-17
ST29161
Argentina
.1993-02-02
CH1502
Argentina
.1994-02-15
CH2507
Argentina
.1997-07-25
ST10568
Argentina
.1995-03-08
Paraguay
.2009-03-10
CH2283
Argentina
.2005-10-01
SF1902
Argentina
.1998-02-23
SF366
Argentina
.1999-12-17
T12550
Argentina
.1995-01-03
T13074
Argentina
.1994-12-30
T2220
Argentina
.1994-02-25
T522
Argentina
.1998-01-20
T5957
Argentina
.1993-12-03
T610
Argentina
.1994-01-22
T777
Argentina
.1994-01-28
T1437
Argentina
.1997-02-10
T717
Argentina
.1998-01-30
CDC__2010EL-1788 450
.
.
* Debido a que la resistencia a los antimicrobianos ha ido en aumento en muchas partes del mundo, es importante determinar la sensibilidad a los antimicrobianos de Vibrio cholerae O1 al inicio de la epidemia y monitorearla periódicamente.
SELECCIÓN DE LOS AGENTES ANTIMICROBIANOS PARA LAS PRUEBAS DE SENSIBILIDAD
Condiciones del test: Medio: Agar Mueller-Hinton Inóculo: Método de crecimiento previo o suspensión de colonia directa, equivalente al estándar 0.5 de Mc Farland. Preparar el inóculo en 0.85% NaCl Incubación: 35 ± 2 ºC, aire, 16-18 horas. Control de Calidad: E.coli ATCC 25922 Servicio ANTIMICROBIANOS INEI – ANLIS Dr Carlos G. Malbran
Esquema de colocación de discos para la determinación de la sensibilidad a los antimicrobianos por el método de difusión en V. cholerae.
TMS
CIP AMP NAL
TET
CMP
NIT
TMS:
trimetoprima/sulfametoxazol,
NIT:
nitrofurantoína/furazolidona,
AMP:
ampicilina, CIP: ciprofloxacina; TET: tetraciclina; CMP: cloranfenicol, NAL: ácido nalidíxico.
Conclusiones • Es importante mantener la vigilancia de V. cholerae: - Para detectar tempranamente la aparición de casos de cólera asociados a V. cholerae O1 u O139. - Para identificar V. cholerae no-O1, no-O139 asociado a casos y brotes de diarrea. - Para monitorear la emergencia de nuevas cepas con potencial patogénico y epidémico, y resistentes. • La incorporación de técnicas moleculares de diagnóstico y subtipificación aportan sensibilidad y especificidad para la Vigilancia de este patógeno
