Reproducción Animal Laboratorio 7 Evaluación del Semen: porcentaje de espermatozoides vivos Objetivos: Familiarizarse con la técnica de la tinción vital y determinar el porcentaje de espermatozoides vivos en una muestra de semen. Asignación: Un alto porcentaje de espermatozoides vivos, con movimientos progresivos y vigorosos, son necesarios para tener un semen de buena calidad. Por medio de una coloración diferencial, puede ser determinado el porcentaje de espermatozoides vivos de una muestra de semen. La determinación de los espermatozoides vivos de una muestra, puede ser usada en conjunción con la evaluación de la motilidad, para una evaluación mas completa del análisis de la calidad del semen. Un porcentaje bastante alto de espermatozoides muertos, puede no ser aparente en la evaluación de la motilidad, porque muchos de los espermatozoides inactivos son movilizados por el choque de los espermatozoides vivos. También un alto porcentaje de espermatozoides vivos es de escaso valor, si los espermatozoides son pocos vigorosos y presentan un movimiento lento y oscilatorio. La tinción de vivos-muertos (tinción vital) y el examen microscópico de la motilidad, son mas concluyentes cuando son usados suplementariamente entre sí. Procedimiento La tinción vital está basada en la diferencia con que las células vivas y muertas absorben ciertos colorantes. En este test los espermatozoides muertos al momento del inicio de la prueba absorben el colorante y aparecen rosados (tinción eosina – nigrosina). Aquellos que se encuentran vivos no absorben el colorante y se presentan blancos. Una coloración diferencial bastante utilizada es la siguiente: 

Eosina al 1%



Nigrosina al 4%



Disolver en buffer fosfato M/8

Pasos a seguir en la tinción vital: 1.

Colocar 1 o 2 gotas de la solución colorante sobre un porta limpio

2.

Coloque una pequeña cantidad de semen sobre el colorante del porta, mezclado uniformemente con ayuda de otro porta limpio.

3.

Coloque sobre la gota de semen y colorante, otro porta y remueva el exceso con la ayuda de un papel de filtro.

4.

Aparte cuidadosamente los portas y seque rápidamente ambos, colocándolos en una platina termostatizada a 37 ºC. Aire caliente de un secador de pelo ayudará a secar más rápidamente.

5.

Contar bajo objetivo seco de alto aumento o por inmersión en aceite.

Si parte del espermatozoide aparece coloreada, tal como el núcleo solamente, cuente este como muerto. Se debe contar un total de 333 espermatozoides y el porcentaje de vivos y muertos puede ser computado fácilmente mediante la siguiente fórmula: Nº de espermatozoides vivos contados X 3 = % de espermatozoides vivos 10 Cuente al azar varios campos del porta para obtener datos representativos. Usando un objetivo de inmersión, se puede obtener una cuenta ligeramente mas precisa, pero es más lenta y tediosa

Preguntas 1.

¿Cómo influencia el porcentaje de espermatozoides vivos la motilidad del semen?

2.

¿Cuál es la correlación entre el porcentaje de espermatozoides vivos y la tasa de concepción del semen?

3.

¿Cuáles son alguitas de las desventajas de la técnica diferencial?