Informe Final de Actividades Prácticas Cátedra de Enfermedades Infecciosas Facultad de Ciencias Veterinarias y Ambientales Noviembre de 2015 Actividades Prácticas desarrolladas en el Establecimiento Caprino “Colonia y Granja Penal Unidad 4. Servicio Penitenciario Provincial”, en el marco de docencia universitaria de alumnos que cursan la materia Enfermedades Infecciosas del 3er año de la carrera de Veterinaria en la Facultad de Ciencias Ambientales y Veterinarias de la Universidad Juan A Maza. OBJETIVOS Aplicar los conocimientos teóricos en las prácticas de bioseguridad en las explotaciones ganaderas y en el reconocimiento y recolección de datos epidemiológicos a campo. Desarrollar habilidades prácticas en la toma de muestra sanguínea por venipunción de vena yugular en la especie caprina. Aplicar los conocimientos teóricos y desarrollar habilidades prácticas acondicionamiento, transporte y procesamiento de muestras biológicas.
en
el
Realizar la determinación serológica de anticuerpos contra Brucella sp., mediante el desarrollo de la técnica tamiz del Antígeno Bufferado en Placa (BPA). Seleccionar y realizar las pruebas de laboratorio confirmatorias para el diagnóstico de brucelosis caprina en función de los resultados de la prueba tamiz. Elaborar un informe en función de los aspectos sanitarios de los animales muestreados y a partir de este realizar sugerencias técnicas para mejorar el aspecto sanitario. CARACTERIZACIÓN DEL HATO En el establecimiento se desarrolla un sistema productivo del tipo semi-extensivo, donde se manejan un total de 143 animales. El fin económico de la producción radica en la venta de cabritos (vivos o faenados) concentrada en Diciembre. El manejo reproductivo de los animales se adapta a la necesidad de tener un volumen importante de cabritos, con peso y edad suficiente, para ser vendido en esta época. Por lo tanto los servicios se encuentran de alguna manera estacionados, de manera que los partos ocurran principalmente en los meses de junio y agosto, para obtener un cabrito de unos 4 o 5 meses para la venta en diciembre. En cuanto a los aspectos sanitarios, se practica desparasitación regular de los animales con ivermectina y no se aplica ningún tipo vacunación en los animales. EPIDEMIOLOGÍA
El hato caprino tradicionalmente se maneja de manera cerrada, no permitiendo la incorporación no deseada de caprinos en el rodeo y controlando la venta e incorporación de animales. Hace unos meses atrás se realizo una compra de dos machos reproductores, adquiridos de dos establecimientos diferentes, los cuales fueron incorporados al hato sin previa cuarentena y análisis serológicos para determinación de enfermedades infecciosas. Estos animales eran portadores del virus de Ectima Contagioso, lo que generó enfermedad clínica en los animales del hato. Los nuevos animales participaron de las actividades de monta de las cabras del establecimiento en el último ciclo reproductivo de los animales. Los porcentajes de preñez no se afectaron, pero se observaron algunos abortos, cercanos a la fecha de parto (junio-agosto de 2015). El establecimiento cuenta con determinaciones serológicas previas para la detección de brucelosis, registrando una prevalencia nula de la enfermedad. METODOLOGÍA DE TRABAJO NORMAS DE BIOSEGURIDAD PARA EXPLOTACIONES GANADERAS: Los alumnos que visitaron el establecimiento con el objetivo de realizar la práctica sobre los animales, portaron vestimenta apropiada para su bioprotección: overol, ambo completo o chaqueta, guardapolvo, antiparras o gafas protectoras, barbijos descartables, guantes de látex y botas de goma o zapatos de trabajo limpios. La misma fue colocada antes del ingreso al corral de los animales y posteriormente, a la salida del corral, fue correctamente almacenada en bolsas descartables para su posterior desinfección y limpieza. Todas las actividades dentro del corral fueron realizadas con absoluta tranquilidad y precaución para evitar la excitación de los animales y posibles lesiones en los alumnos. Los materiales de residuos generados como producto de la toma de muestra sanguínea y manejo de los animales fueron correctamente desechados en bolsas plásticas de color rojo y posteriormente procesados en la Universidad en el Área de Residuos Patológicos. TOMA DE MUESTRA: El muestreo realizado en los caprinos del establecimiento fue del tipo aleatorio en hembras de cualquier edad y categoría y del tipo dirigido en machos, seleccionando para el muestreo a los machos recientemente incorporados en el establecimiento. La toma de muestra sanguínea fue realizada por punción yugular. La vena yugular se encontró con frecuencia debajo de la piel e incluida en el tejido adiposo. La piel es blanda y la aguja (calibre 18-22 de 25 mm) se utilizó con facilidad. No se utilizó jeringa para la extracción de sangre con el fin de reducir la posible hemólisis que esto genera. Se utilizó anticoagulante EDTA para el tratamiento de las muestras, permitiendo posteriormente la obtención de plasma sanguíneo. Los tubos fueron correctamente identificados in situ y se confeccionó una planilla con el número de caravana de los animales muestreados. Una vez trasladados al laboratorio, las muestras de sangre con EDTA fueron centrifugadas (5000 rpm durante 5 minutos) y posteriormente, se extrajo la columna de plasma, almacenándola a – 20º C hasta su procesamiento. Se muestrearon exitosamente un total de 65 animales. La muestra poblacional estuvo conformada por 2 machos y 63 hembras caprinas de diversas edades, categorías y estados fisiológicos.
DETERMINACIÓN SEROLÓGICA DE LA PREVALENCIA DE BRUCELOSIS EN LAS CABRAS MUESTREADAS: La prueba de BPA fue utilizada como prueba tamiz para el análisis de la presencia de anticuerpos contra Brucella sp. en el plasma de los caprinos muestreados. El BPA es una prueba cualitaliva de aglutinación en placa que presenta la ventaja de ser realizada en una sola dilución. El resultado se expresa como POSITIVO o NEGATIVO. Los animales se clasifican como negativos o reaccionantes debiendo estos últimos ser sometidos a pruebas complementarias para su diagnóstico definitivo. Los sueros que resultaron positivos al BPA fueron procesados por la prueba de seroaglutinación (SAT) en tubos y 2 mercaptoetanol (2-ME). PRUEBA SCREENING O TAMIZ: ANTIGENO BUFFERADO EN PLACA (BPA)
PRUEBA DE SERO-AGLUTINACION LENTA EN TUBO (SAT y 2-ME)
El antígeno de Wright a emplear debe ser aprobado por SENASA, previamente agitado durante 15 minutos. Se prepara al 1% o 2%, por lo que debe diluirse 100 o 200 veces en solución salina al 0,85% que contiene 0,5% de fenol (Solución salina fenolada al 0,5%). Se recomienda hacer esta dilución 12 horas antes de su uso.
La presencia de hemolisis en las muestras de suero interfiere con la prueba de aglutinación en tubo, no sólo porque la coloración puede enmascarar la reacción de aglutinación, sino porque se forma un precipitado como resultado de la acción del fenol que contiene el antígeno sobre la hemoglobina libre. Es muy difícil distinguir esta falsa reacción de la aglutinación específica del antígeno. CONSIDERACIONES ESPECIALES:
"FALSOS POSITIVOS" en las pruebas de seroaglutinación: Los "falsos positivos" en las reacciones se deben a varias causas, tales como las reacciones cruzadas debidas a anticuerpos originados por bacterias que tienen lipopolisacáridos superficiales similares a los de Brucella. El origen de muchas reacciones inespecíficas del caprino no se conoce. Sin embargo se sabe que algunas salmonellas dan reacciones cruzadas. Se ha comprobado que hay una relación antigénica entre Brucella y Escherichia coli y con Yersinia enterocolítica. "FALSOS NEGATIVOS" en las pruebas de seroaglutinación: Los "falsos negativos" en las pruebas de aglutinación se presentan durante el período de incubación es decir desde la exposición a la infección hasta la aparición de las aglutininas. En hembras expuestas por primera vez a la infección durante la gestación es frecuente que las aglutininas aparezcan varios días a dos semanas después del aborto o del parto. Además hay animales infectados que nunca alcanzan un título aglutinante significativo. De especial interés son algunos animales con infección crónica, que se encuentran en los llamados "rodeos problema" y en los cuales las IgM han bajado a un nivel no diagnóstico y casi todos los anticuerpos están constituidos por IgG. Estos animales pueden ser reconocidos por las pruebas complementarias. Los criterios diagnósticos se emplearon de acuerdo reportados en base a la Ley 24.696, que declara de interés nacional el control y erradicación de la Brucelosis en las especies bovina, ovina, suina, caprina y otras en todo el Territorio Nacional. Los mismos se describen el siguiente tabla: Caprinos machos mayores de 6 meses de edad y hembras no vacunadas.
Un animal SOSPECHOSO debe ser sangrado nuevamente a los 30 días, luego de lo cual se definirá la categoría de POSITIVO o NEGATIVO, según los resultados obtenidos. De no definirse el diagnostico deberá considerarse como POSITIVO y someterse a las pruebas confirmatorias en un laboratorio de referencia.
RESULTADOS El muestreo realizado involucró al 45% de la población de caprinos alojados en el hato caprino. La siguiente tabla muestra los resultados de las pruebas serológicas empleadas para la detección de la incidencia de brucelosis caprina en los animales muestreados. Nº de CARAVANA
BPA SAT
2ME
CONDICION
004 MACHO 009 047
+ + +
1:50 1.25 1:200 1.50 -
POSITIVO POSITIVO FALSO POSITIVO
060
+
-
-
FALSO POSITIVO
062
+
-
-
FALSO POSITIVO
075
+
-
-
FALSO POSITIVO
078 MACHO
+
-
-
FALSO POSITIVO
083
+
-
1:200 POSITIVO
100
+
-
1:200 POSITIVO
106
+
-
1:25
POSITIVO
121
+
1:25
0
FALSO POSITIVO
124
+
1:100 1:100 POSITIVO
130
+
1:25
0
FALSO POSITIVO
133
+
0
0
FALSO POSITIVO
OBSERVACION
Reacción cruzada o inespecífica. Reacción cruzada o inespecífica. Reacción cruzada o inespecífica. Reacción cruzada o inespecífica. Reacción cruzada o inespecífica. Fenómeno de zona o falso negativo Fenómeno de zona o falso negativo Fenómeno de zona o falso negativo Reacción cruzada o inespecífica. Fenómeno de zona o falso negativo Reacción cruzada o inespecífica. Reacción cruzada o inespecífica.
CONCLUSION En base a estos resultados se determinó una incidencia del 9% en los animales muestreados. Con estos resultados se propone muestrear al 55 % restante de la población caprina residente en el hato y realizar las pruebas serológicas en estas muestras, eliminar a los animales que resulten positivos, establecer la prevalencia final de la enfermedad y en función del porcentaje de animales involucrados incluir la vacunación con la cepa Rev-1.
Evaluación de la actividad práctica: El correcto desempeño de los alumnos durante la realización de las actividades propuestas generó una evaluación positiva en los objetivos a desarrollar. Por lo tanto, en función de la evaluación de los aspectos teóricos desarrollados durante los trabajos prácticos de la materia y la ejecución correcta de las actividades prácticas propuestas, se decide aprobar la parte práctica de la materia Enfermedades Infecciosas a la totalidad de los alumnos que participaron de estas actividades.
Ph.D. Vet. Diego Grilli. Jefe de Trabajos Prácticos. Cátedra de Enfermedades Infecciosas. Facultad de Ciencias Veterinarias y Ambientales. Universidad Juan Agustín Maza.
